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血清中16种全氟及多氟烷基化合物的测定-龙8唯一官网

更新时间:2024-07-24       点击次数:87

简介

本方法使用创新型分体式hmr净化管/96孔板结合96正压固相萃取装置一步式净化血清样品,再通过lc-ms/ms进行检测,回收率达90%左右。样品处理过程简单,结果准确。

 

方法优势

ø                      蛋白沉淀和磷脂去除一步完成,可有效去除血清中蛋白、磷脂类化合物对实验结果的影响

ø                      通过式净化,极大简化前处理步骤,约1h即可完成前处理操作

ø                      上样量仅需50μl,大大节省了宝贵的样品

ø                      试剂耗材使用量更少,更加环保节约

ø                      柱效远超直通式spe,回收率稳定,可达90%左右

 

配套设备及耗材

序号

产品名称

产品描述

1

96孔正压固相萃取装置

ez pre-96正压固相萃取装置

2

96孔氮吹仪

ez vap-96氮吹仪

3

双位96孔氮吹仪

ez vap-192双位96孔氮吹仪

4

mixmate® 混匀小精灵

mixmate®主机,不含样品管管架,230 v/50-60 hzcn

5

8道移液器

8-通道,10-100µl, 可调量程

6

超效分体96孔集成板hmr

hmr s-micro bio 96 well, 15mg, 1 ml, 1/pk

7

超效分体96spehmr

hmr s-micro bio spe, 15mg, 1 ml, 100/pk

8

超效96孔板微径小柱适配器

micro columnadapter racksus,1/pk

9

20全氟混标(包含方法中15种全氟)

pfas mixture with 20 analytes, 5 µg/ml in methanol/water1ml

10

11--3-氧杂全氟十一烷磺酸钾

50 µg/ml1ml,甲醇/水,cas83329-89-9

11

13种全氟内标

mass-labelled pfc extraction standards solution 2.0μg/ml 1.2ml

12

血清中全氟质控品y2403

inspq pfc reference material y24031/kit

13

血清中全氟质控品y2301

inspq pfc reference material y23011/kit

14

血清中全氟质控品y2304

inspq pfc reference material y23041/kit

15

leosil c18/pfp核壳柱(gb23200.121方法专用)

leosil shell c18/pfp, 2.7µm, 100* 2.1mm, 1/pk

16

96孔收集板

collection plate, 1 ml/round/u-shaped, 96 well, 10/pk

17

封板膜

660 tape sealing pad for 96 well plate25 sheets/pad10pad/pk

 

样品前处理

 

 

仪器条件

1)色谱条件

色谱柱:leosil c18/pfp核壳柱 (2.7µm, 100* 2.1mm

流动相:5mmol/l乙酸甲醇(a),5mmol/l乙酸水溶液(b

流速:0.4ml/min

柱温:50℃

进样量:2μl

 

流动相梯度表

 

 

2)质谱条件

ab 6500 质谱检测器采用多反应检测模式(multiple

reaction monitoringmrm),esi负离子模式。

离子源:电喷雾离子源;

扫描方式:负离子扫描;

检测方式:多反应离子监测(mrm);

电喷雾电压:-4500v

离子源温度:400℃

辅助气160psi

辅助气260psi

气帘气:30psi

碰撞气体:medium

 

目标pfass的离子对、锥孔电压、碰撞能量等参数见下表

 

 

 

方法定量限

在以下两种方法中取最大值作为本项目的方法定量限(limit of quantificationloq):(1)在实际血清基质中满足信噪比大于10的最低浓度,信噪比采用rmsroot mean squarerms)方法;(2)标准曲线工作范围内满足实测浓度在理论值偏差±20%之内的最低浓度。由于本研究中样品未经浓缩和稀释,无稀释倍数,因此方法定量限即为loq,如下表。

 

16pfass的定量限

 

 

回收率和精密度

血清中16种全氟化合物不同水平加标回收率和精密度(n=6

 

 

 

实验注意事项

1、内标体积太小(5020微升),稍微有损失,就会影响定量,所以建议先加样品、再加内标,最后加乙腈;

2、加液体过程中,一定注意尽量让移液枪的枪头接近净化管中最上层筛板加液。需要正确使用移液枪,特别是小体积加样时;

3、建议分两次加入乙腈。如果只加一次乙腈,可能洗脱不完全,净化管里有残留。压完一次,加入乙腈,再正压;

4、乙腈:血清的比例从31开始优化;

5、其他项目根据化合物的性质选择甲醇或乙腈作为提取溶剂。

 

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